Морской биологический журнал. - 2022. - Т. 7, № 3
Постоянная ссылка на коллекцию
Поиск
Поиск Морской биологический журнал. - 2022. - Т. 7, № 3 по автору "Bochko, D. N."
Сейчас показывается 1 - 1 из 1
Результаты на странице
Настройки сортировки
Материал Культивирование и регенерация трихоплакса Trichoplax sp. H2 из фрагментов тела и агрегатов диссоциированных клеток: перспективы генетической модификации(2022) Кузнецов, А. В.; Вайнер, В. И.; Волкова, Ю. М.; Цыганкова, В. М.; Бочко, Д. Н.; Муханов, В. С.Выполнены исследования на культивируемом в лаборатории простейшем многоклеточном животном Trichoplax sp. H2 с целью дальнейшей генетической модификации этого организма. Предлагается вводить генетическую информацию в суспензию клеток после диссоциации тела трихоплакса на отдельные клетки с последующей их агрегацией и регенерацией полученных агломератов в жизнеспособное животное. С этой целью мы исследовали динамику роста трихоплаксов в чашках Петри на матах из одноклеточной водоросли Tetraselmis marina. Особи были однородны на стадии экспоненциального роста. В экспериментах по посттравматической регенерации разрезали подопытных животных радиально и исследовали восстановление полученных частей под микроскопом. Оценивали интенсивность роста и размножения трихоплаксов на водорослевых матах — показатели, ухудшавшиеся по мере измельчения животных. Обнаружено, что утраченная часть тела трихоплакса замещается за счёт ремоделинга оставшихся клеток. После витальной окраски животных подвергали диссоциации на отдельные клетки в среде, лишённой двухвалентных катионов. Идентифицированы клетки грушевидной или округлой формы и клетки эпителия со жгутиками, которые сохраняли двигательную активность более 12 ч. Для количественной оценки популяции клеток с помощью проточной цитометрии пластинки трихоплаксов дезинтегрировали при добавлении 10 мкМ амлодипина. Показано, что трихоплакс размером 0,5–1,0 мм состоит примерно из 10 000 клеток. Обработка животных 10%-ным бычьим сывороточным альбумином (БСА) в течение различных промежутков времени свидетельствует в пользу существования тотипотентных клеток на периферии трихоплакса, вероятно в пояске пластинки. В экспериментах по репаративной регенерации удалось добиться диссоциации трихоплаксов на отдельные клетки при обработке 0,1%-ным БСА, а затем воссоздать живые организмы путём центрифугирования суспензии клеток и последующего диспергирования крупного осадка на фрагменты до 0,1 мм перед высевом многоклеточных агрегатов на питательные маты. Развитие этих агрегатов сопровождалось активными движениями клеток и эпителизацией поверхности, что приводило к увеличению клеточной массы, формированию пластинки, росту и дальнейшему вегетативному делению трихоплаксов. Предполагается, что пребывание экспериментальных животных на искусственной стадии одиночной клетки в ряду бесполых размножений позволит интродуцировать в трихоплакса чужеродную генетическую информацию, например с целью изучения сигнальных систем, организации и функционирования этого многоклеточного организма. Трансгенез, основанный на диссоциации тела животного на отдельные клетки, возможно, будет применим и к другим организмам, обладающим высоким регенеративным потенциалом.