МАРКЕРЫ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ДВУХ ТИПОВ ФАГОЦИТОВ ГОЛОТУРИИ EUPENTACTA FRAUDATRIX ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИИ ТЕРМОСТАБИЛЬНОГО ТОКСИНА БАКТЕРИИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS

Целью исследования явилось изучение показателей ответа фагоцитов Ф1 и Ф2 голотурии Eupentacta fraudatrix на воздействие термостабильного токсина Yersinia pseudotuberculosis (ТсТYp) in vitro и in vivo. Фракции фагоцитов голотурии получали центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина. Клетки инкубировали с ТсТYp в концентрациях 0,2 и 0,5 мкг/мл при 22°С в течение 48 ч. В серии опытов in vivo использовали ТсТYp в дозах 0,5 и 1,25 мкг/г. Фагоциты выделяли через 5 ч. Уровень нитросинего тетразолия (НСТ) измеряли колориметрическим методом. Апоптоз определяли, используя методы окраски Hoechst 33342 и элекрофореза ДНК в агарозном геле. Жизнеспособность клеток оценивали тестом исключения трипанового синего. Измерение уровня интерлейкин-1α-подобных веществ (ИЛ-1α-ПВ) в клетках проводили методом ИФА. Выявлена разная направленность изменений исследованных показателей в двух типах фагоцитов голотурии E. fraudatrix в ответ на воздействие ТсТYp. Предполагается различная роль отдельных типов фагоцитов в антибактериальной защите.

Аннотация (alternative)

This work aims at the comparable study on the markers of response of two phagocyte fractions (P1 and P2) of the holothurian Eupentacta fraudatrix to the treatment with a thermostable toxin of bacteria Yersinia pseudotuberculosis in vitro and in vivo. The phagocyte fractions were isolated using a ficoll-verographine discontinous gradient. The cells were incubated with ТsТYp (0.2 and 0.5 μg/ml) at 22°C for 48 h. In the series of in vivo experiments ТsТYp was used at the doses of 0.5 и 1.25 μg/ml. Phagocytes were isolated in 5 h. The nitroblue tetrazolium level was measured by the colorimetric method. Apoptosis was evaluated with using both methods of DNA agarose gel electrophoresis and Hoechst 33342 staining. Cell viability was estimated with a trypan blue exclusion test. The level of IL-1α-like substances was determined using kit for immune enzyme analysis. The results obtained indicate that ТsТYp induced differently directed changes in the markers studied in the two types of phagocytes in the holothurian E. fraudatrix. It suggests different roles of those two types in antibacterial defense.

Ключевые слова

голотурии, Eupentacta fraudatrix, фагоциты, интерлейкин-1α-подобные вещества, апоптоз, бактериальный токсин, активные формы кислорода

Библиографическое описание

Морские биологические исследования: достижения и перспективы: в 3-х т. : сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, приуроченной к 145-летию Севастопольской биологической станции (Севастополь, 19–24 сентября 2016 г.) / под общ. ред. А.В. Гаевской. – Севастополь : ЭКОСИ-Гидрофизика, 2016. – Т. 1. – 493с. https://repository.marine-research.ru/handle/299011/3073

URI

https://repository.marine-research.ru/handle/299011/3073

Коллекции

Морские биологические исследования: достижения и перспективы. Т. 1 / Marine biological research: achievements and perspectives. Vol. 1

Полная информация о материале